assayquant用于靶標生物學和藥物發現與開發的酶和抑制劑活性測定

更新時間：2022-07-11 點擊次數：2317

使用新型傳感器-肽底物對酶和抑制劑活性進行熒光微孔板檢測的*組合

assayquant用于靶標生物學和藥物發現與開發的酶和抑制劑活性測定

AssayQuant 的PhosphoSens ® 技術構成了其廣泛的 400 多種*的酶和抑制劑檢測產品組合的基礎。每種檢測都具有以試劑盒或散裝傳感器肽形式提供的新型傳感器肽底物，并且作為相關的獨立試劑家族，每個成分都經過仔細測試，以確保其經過優化以用于適用的檢測。散裝試劑以折扣價提供，適用于高通量或大容量應用。

我們提供兩種檢測形式：連續和終點/紅色。兩種格式都與 96、384 和 1536 孔板兼容，并產生與測量時反應混合物中磷酸化產物的量成正比的信號。在這兩種情況下，效力結果均與基于細胞的檢測結果一致，加速并改進了先導識別、表征、分析和優化研究，從而有可能更快地開發出更有效的藥物。

兩種分析形式都與廣泛的 ATP 濃度（包括低至生理 [mM] 水平）*兼容，并使用生理 Mg ++、 Mn ++、 Ca ++離子濃度和源自已知底物的肽序列。使用我們的選擇性 PhosphoSens 底物，可以使用粗制細胞或組織裂解物進行檢測，提供更多生理環境，包括測量活細胞中形成的功能性復合物中激酶的活性。

貨號	品名	規格	品牌
CSKS-AQT0101	PhosphoSens Kit	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0734	BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0734 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0157	PEPTIDE SUBSTRATE	1mg	AssayQuant
AQT0449	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT0733	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT0255B	PEPTIDE SUBSTRATE	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0296B	BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0296, Peptide substrate, 1mg net lyophilized	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0258B	PEPTIDE SUBSTRATE	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0297B	PEPTIDE SUBSTRATE	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0104	PEPTIDE SUBSTRATE	1mg	AssayQuant
AQT0691	PLK1	1mg	AssayQuant
AQT0515	Cysteine Sox Kinase Sensor	1mg	AssayQuant
AQT0536	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT0297	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT0258	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT0001	PhosphoSensKit	1mg	AssayQuant
AQT50	50mM(50*)Europium	15ml	AssayQuant
CSKS-AQT0255B	BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0255, Peptide substrate, 1mg net lyophilized	1mg	AssayQuant
CSKS-AQT0459B	BULK Cysteine Sox Kinase Sensor, AQT0459 , Peptide substrate, 1mg net lyophilized	1mg	AssayQuant

連續測定

PhosphoSens 連續測定利用簡單的添加和讀取協議，提供實時動態測量的能力，以及直接的熒光強度測量。這些測定通過允許測量初始反應速率（測量為初始線性區域的斜率）來提供高準確度和精確度，通常在前 30-60 分鐘內并包括許多數據點，每 30 秒到 2 分鐘執行一次讀數. 這種連續測定形式還允許校正化合物自發熒光，因為此背景信號不會隨時間而變化，并且可以通過從總熒光（包括酶在內的所有成分）中減去背景信號（包括化合物和反應的所有成分）來校正，以確定每個時間點的凈信號. 連續格式基本上與任何市售的能夠進行動力學讀數的熒光酶標儀以及相關的實驗室自動化設備兼容。不需要停止溶液或淬火/顯影步驟，最大限度地減少時間，同時最大限度地提高產量。

終點檢測

由于許多化合物庫都包含自發熒光化合物，AssayQuant 提供的 PhosphoSens Red 分析允許在更長（>600 nm）波長下進行檢測，具有相同的最大激發，并使用時間分辨熒光。我們建議在發射波長處使用 100 µs 的激發和檢測延遲，采集時間為 300 µs，以避免來自反應混合物中熒光材料的信號污染，這些材料的壽命非常短（納秒）。我們的終點檢測使用與我們的連續檢測相同的反應設置，一旦反應運行，將向每個孔中添加基于銪離子 (Eu 3+ ) 的試劑，以取代 Mg ++在螯合復合物中。Sox 熒光團的激發使銪發光敏感，產生最大 615 nm（紅色）的光，可以使用標準濾光片進行測量。PhosphoSens Red 檢測通常可以使用與連續格式相同的 PhosphoSens 底物。然而，一些高酸性底物（例如，那些常用于酪氨酸激酶的底物）可能會導致紅色格式的低信噪比。為了解決這種情況，我們已經確定了替代傳感器肽序列，這些序列允許優化 PhosphoSens Red 測定，信號與背景比為 2 或更高，提供 0.7 或更高的 Z' 值（0.5 被認為是好的）。在這些情況下，相同的序列可用于連續格式，

三個酶檢測家族和一個*的檢測生成過程

除了我們的連續和終點/紅酶和抑制劑活性檢測外，AssayQuant 還提供三種不同酶家族的檢測：蛋白激酶、蛋白磷酸酶和脂質激酶。如我們的技術頁面所述，所有 AssayQuant 蛋白激酶和磷酸酶測定均基于使用基于熒光傳感器肽的底物。使用脂質 (DAG) 底物的脂質激酶（二酰基甘油激酶或 DGK）目前僅作為 AssayQuant測試服務的一部分提供。