Creative Biolabs HPAB-M0560-YC Human Anti-LAM Recombinant Antibody介紹

?? 產(chǎn)品描述

產(chǎn)品全稱：Human Anti-LAM Recombinant Antibody

中文名稱：重組人源抗脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）抗體

國(guó)際貨號(hào)：HPAB-M0560-YC

宿主物種：Human（人源）

抗體類型：Human IgG, κ（可根據(jù)需求調(diào)整為 IgM 或 IgA）

特異性靶點(diǎn)：LAM（Liparabinomannan，脂阿拉伯甘露聚糖）

交叉反應(yīng)性：Mycobacterium Tuberculosis（結(jié)核分枝桿菌）

核心應(yīng)用：ELISA、Western Blot、Microarray（微陣列）、Blocking（阻斷實(shí)驗(yàn)）

蛋白純度：>95%（經(jīng)還原型SDS-PAGE與SEC-HPLC雙重驗(yàn)證）

標(biāo)準(zhǔn)濃度：具體濃度詳見(jiàn)每支產(chǎn)品標(biāo)簽（典型范圍：0.5 mg/mL - 2.0 mg/mL）

保存緩沖液：1x PBS（磷酸鹽緩沖液，pH 7.4）

防腐劑：無(wú)（生產(chǎn)及凍存過(guò)程未添加疊氮鈉或硫柳汞等防腐劑）

產(chǎn)品形態(tài)：無(wú)菌過(guò)濾液體（于無(wú)菌條件下分裝至低吸附EP管中）

品牌歸屬：Creative Biolabs

本產(chǎn)品是一款利用前沿基因工程技術(shù)與重組抗體表達(dá)體系制備的高特異性免疫檢測(cè)試劑。它靶向結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁上的特征性糖脂抗原——脂阿拉伯甘露聚糖（LAM），并能表現(xiàn)出高的結(jié)合親和力。依托于成熟的Hi-Affi™重組抗體開(kāi)發(fā)平臺(tái)，該抗體不僅在分子層面上實(shí)現(xiàn)了序列的精準(zhǔn)定義，還在表達(dá)純化過(guò)程中去除了內(nèi)毒素與宿主DNA殘留，確保了在臨床前研究與體外診斷（IVD）原料篩選中的絕對(duì)安全性與合規(guī)性。

?? 產(chǎn)品背景與工作原理

脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）的生物學(xué)意義

LAM（Liparabinomannan）是結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium Tuberculosis）及相關(guān)非結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中含量豐富、結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的糖脂分子。它由甘露聚糖骨架、阿拉伯糖側(cè)鏈以及磷脂酰肌醇帽結(jié)構(gòu)組成。在結(jié)核菌的感染周期中，LAM不僅維持著細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性，更作為關(guān)鍵的毒力因子，通過(guò)調(diào)節(jié)宿主巨噬細(xì)胞的凋亡通路、抑制吞噬體-溶酶體融合來(lái)幫助病原體在宿主細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期潛伏。此外，LAM會(huì)從代謝活躍的結(jié)核桿菌中釋放到外周血液或尿液中，這使其成為開(kāi)發(fā)結(jié)核病（TB）無(wú)創(chuàng)診斷標(biāo)志物的“黃金靶點(diǎn)"。

重組抗體的作用機(jī)制

本產(chǎn)品通過(guò)基因重組技術(shù)，將特異性識(shí)別LAM表位的抗體重鏈與輕鏈基因克隆至表達(dá)載體中，并在哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如HEK293）或無(wú)血清原核系統(tǒng)中進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵表達(dá)。其工作原理基于經(jīng)典的抗原-抗體特異性結(jié)合反應(yīng)：當(dāng)該重組抗體與樣本中的LAM分子相遇時(shí)，其互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）會(huì)通過(guò)疏水作用、氫鍵和范德華力與LAM的阿拉伯糖帽或甘露糖核心發(fā)生高親和力的立體構(gòu)象契合。這種特異性結(jié)合可以作為“分子探針"，在后續(xù)加入二抗（如HRP標(biāo)記的抗人IgG）及底物顯色系統(tǒng)后，實(shí)現(xiàn)信號(hào)的指數(shù)級(jí)放大，從而完成對(duì)極低豐度LAM抗原的精準(zhǔn)定性或定量分析。

? 產(chǎn)品核心特點(diǎn)

1. 純度與均一性

  傳統(tǒng)腹水制備的多克隆抗體往往伴隨著大量的雜蛋白，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的信噪比。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)蛋白A/G親和層析以及精細(xì)的離子交換層析純化，最終純度經(jīng)SEC-HPLC（體積排阻高效液相色譜）測(cè)定高達(dá)95.33%以上。在還原型SDS-PAGE電泳中，僅呈現(xiàn)清晰的約50 kDa重鏈和25 kDa輕鏈條帶，無(wú)雜帶干擾。

2. 批次間一致性

  得益于確定的基因序列和標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞培養(yǎng)工藝，該重組抗體擺脫了傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)因染色體丟失或培養(yǎng)條件波動(dòng)導(dǎo)致的“飄變"風(fēng)險(xiǎn)。每一批次的HPAB-M0560-YC在親和力常數(shù)（KD值）、表位識(shí)別位點(diǎn)及效價(jià)上均保持高度一致，為需要長(zhǎng)期追蹤的大規(guī)模隊(duì)列研究或體外診斷試劑盒的注冊(cè)申報(bào)提供了堅(jiān)實(shí)的保障。

3. 動(dòng)物成分零殘留（Animal-Free）

  在研發(fā)與生產(chǎn)全鏈條中，未使用任何動(dòng)物源性酶類或血清，極大地降低了實(shí)驗(yàn)中因宿主殘留蛋白引發(fā)的非特異性背景干擾，滿足下游細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)及人體臨床診斷的原料安全標(biāo)準(zhǔn)。

4. 多應(yīng)用場(chǎng)景的廣泛兼容性

  無(wú)論是在高通量ELISA板孔中捕捉游離的LAM抗原，還是在Western Blot中鎖定經(jīng)過(guò)SDS-PAGE分離變性的糖脂條帶，亦或是在微陣列芯片上作為捕獲探針，該抗體均能展現(xiàn)出線性寬廣、背景極低的優(yōu)異性能。

??? 解決的實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)

在使用傳統(tǒng)抗體制備方法進(jìn)行結(jié)核抗原檢測(cè)時(shí)，科研人員常常面臨以下令人棘手的難題：

•   靈敏度不足導(dǎo)致假陰性：傳統(tǒng)多抗對(duì)LAM這類糖脂抗原的親和力較弱，當(dāng)患者處于結(jié)核感染早期或免疫力低下時(shí)，體液中微量的LAM無(wú)法被有效捕獲，從而導(dǎo)致漏檢。本產(chǎn)品憑借重組技術(shù)定向篩選出的高親和力克隆，將檢測(cè)下限（LoD）推進(jìn)了一個(gè)數(shù)量級(jí)。

•   特異性交叉引發(fā)假陽(yáng)性：結(jié)核分枝桿菌與其他環(huán)境中的腐生分枝桿菌在細(xì)胞壁成分上具有高度同源性。普通抗體極易發(fā)生交叉反應(yīng)，而本產(chǎn)品通過(guò)嚴(yán)苛的陰性/陽(yáng)性篩選，確保只對(duì)M. Tuberculosis來(lái)源的LAM產(chǎn)生特異性應(yīng)答。

•   試劑批間差破壞數(shù)據(jù)連續(xù)性：長(zhǎng)期縱向研究（Longitudinal Study）需要數(shù)年的隨訪檢測(cè)，傳統(tǒng)抗體每批次的差異會(huì)導(dǎo)致歷史數(shù)據(jù)無(wú)法與新數(shù)據(jù)在同一個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)模型中對(duì)齊。本產(chǎn)品的無(wú)限增殖特性解決了這一痛點(diǎn)。

•   下游偶聯(lián)困難：傳統(tǒng)抗體含有大量BSA或明膠保護(hù)劑，在生物素化或熒光標(biāo)記時(shí)效率極低。本產(chǎn)品溶于純凈的PBS中，為科研人員進(jìn)行下游化學(xué)偶聯(lián)改造提供了極大的便利。

?? 儲(chǔ)存與復(fù)溶規(guī)范

為了保證您手中的每一瓶 HPAB-M0560-YC 都能發(fā)揮出標(biāo)稱的最佳性能，請(qǐng)務(wù)必嚴(yán)格遵守以下儲(chǔ)存與操作規(guī)范：

短期儲(chǔ)存（1 - 2周）

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將其直立放置于 2℃ - 8℃ 的家用冰箱冷藏室中保存。在此期間，盡量避免反復(fù)拿取導(dǎo)致溫度劇烈波動(dòng)。

長(zhǎng)期儲(chǔ)存（-20℃ 及以下）

若計(jì)劃在超過(guò)兩周的時(shí)間內(nèi)不使用該產(chǎn)品，強(qiáng)烈建議進(jìn)行分裝（Aliquot）。使用低吸附性的無(wú)菌離心管，每管分裝 10 μL 至 50 μL（根據(jù)日常單次使用量而定）。置于 -20℃ 獨(dú)立冷凍室中避光保存。在此條件下，抗體的活性可穩(wěn)定保持至少 24 個(gè)月。

操作注意事項(xiàng)（極其重要）

1. 開(kāi)蓋前離心：在運(yùn)輸過(guò)程中，少量抗體粉末或液體會(huì)粘附在管蓋或管壁上方。請(qǐng)?jiān)陂_(kāi)蓋前，使用微型離心機(jī)以 10,000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 30 秒，確保全部試劑沉降至管底。

2. 避免反復(fù)凍融：反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的聚集和變性，從而使效價(jià)大幅下降。這就是為什么我們強(qiáng)烈要求您進(jìn)行預(yù)分裝的原因。一旦從 -20℃ 取出解凍，若一次未用完，切勿再次凍存，只能轉(zhuǎn)移至 4℃ 并在一周內(nèi)盡快用完。

3. 緩沖液兼容性：本產(chǎn)品以純凈 PBS 配制。如果您需要在特定緩沖液（如碳酸鹽包被液、Tris緩沖液）中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)使用相應(yīng)緩沖液稀釋抗體，并注意最終pH值應(yīng)維持在 7.0 - 7.6 之間，以防抗體失活。

?? 使用方法與操作規(guī)程

為了幫助您快速上手并獲得可重復(fù)的優(yōu)質(zhì)數(shù)據(jù)，我們針對(duì)該抗體適用的四大核心應(yīng)用場(chǎng)景，提供了經(jīng)過(guò)內(nèi)部?jī)?yōu)化的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)方案。您可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的具體條件在此基礎(chǔ)上進(jìn)行微調(diào)。

1. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）方案

ELISA 是本產(chǎn)品最常應(yīng)用的場(chǎng)景，主要用于定量檢測(cè)臨床尿液、血清或培養(yǎng)上清中的游離 LAM 抗原。

•   包被（Coating）：使用 0.05 M 碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）將 HPAB-M0560-YC 稀釋至 2 - 5 μg/mL。向每個(gè) ELISA 板孔中加入 100 μL，封板后置于 4℃ 孵育過(guò)夜（12-16小時(shí)）。

•   封閉（Blocking）：甩干包被液，每孔加入 200 μL 含 3% BSA 或 5% 脫脂奶粉的 PBST 緩沖液，37℃ 孵育 1-2 小時(shí)，以降低非特異性吸附。

•   加樣與孵育：用 PBST 洗滌液洗板 3 次。加入梯度稀釋的 LAM 標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本（100 μL/孔），37℃ 孵育 1 小時(shí)。

•   加酶標(biāo)二抗：洗板 3 次。加入 HRP 標(biāo)記的抗人 IgG（或 IgM，視一抗亞型而定）二抗，37℃ 孵育 45 分鐘。

•   顯色與終止：洗板 5 次。加入 TMB 顯色底物（100 μL/孔），避光反應(yīng) 10-15 分鐘。加入 1 M 硫酸終止液（50 μL/孔）。使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長(zhǎng)下讀取 OD 值。

2. Western Blot（蛋白質(zhì)印跡）方案

Western Blot 主要用于確認(rèn)樣本中 LAM 的分子量大小（通常在 20-40 kDa 范圍內(nèi)遷移，但因糖基化程度不同會(huì)呈現(xiàn)彌散條帶）。

•   電泳與轉(zhuǎn)膜：將提取的樣本與 5x 上樣緩沖液混合后煮沸變性。進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳分離，隨后通過(guò)濕轉(zhuǎn)法或半干轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至 PVDF 或 NC 膜上。

•   封閉：使用 5% 脫脂牛奶或 BSA 的 TBST 緩沖液室溫封閉膜 1 小時(shí)。

•   一抗孵育：用 TBST 稀釋 HPAB-M0560-YC（建議起始稀釋比例為 1:1000 - 1:5000），將膜浸入一抗溶液中，4℃ 平緩搖動(dòng)孵育過(guò)夜。

•   二抗孵育與顯影：TBST 洗膜 3 次，每次 5 分鐘。加入 IRDye 800CW 標(biāo)記的抗人二抗（1:10000 稀釋），室溫避光孵育 1 小時(shí)。再次洗膜后，使用 Odyssey 雙色紅外激光成像系統(tǒng)或化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行顯影定影。

3. Microarray（微陣列/芯片）方案

用于高通量篩選或多重檢測(cè)。

將 HPAB-M0560-YC 用打印緩沖液（如 ArrayIt Spotting Solution）稀釋至 0.1 - 0.5 mg/mL。使用微陣列打印機(jī)器人將其點(diǎn)樣于醛基化玻片或 384 孔板上。點(diǎn)樣后在濕度控制環(huán)境中室溫干燥過(guò)夜，隨后進(jìn)行紫外線交聯(lián)固定。后續(xù)步驟與 ELISA 類似，依次進(jìn)行封閉、樣本孵育、熒光二抗孵育及芯片掃描。

4. Blocking（阻斷/中和）實(shí)驗(yàn)方案

用于細(xì)胞水平的結(jié)核感染機(jī)制研究。

在體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞（如 THP-1 或 Raw264.7）感染結(jié)核分枝桿菌前，預(yù)先在培養(yǎng)基中加入 HPAB-M0560-YC（終濃度 10 - 50 μg/mL）。抗體將與培養(yǎng)基中游離的 LAM 結(jié)合，或在細(xì)菌表面占據(jù) LAM 位點(diǎn)，從而阻斷 LAM 與宿主細(xì)胞表面 C型凝集素受體（如 Dectin-2）的結(jié)合，進(jìn)而觀察由此引發(fā)的細(xì)胞因子（TNF-α, IL-6）分泌水平變化。

?? 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案（Troubleshooting）

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到挫折是科學(xué)研究的一部分。我們整理了全球用戶在使用同類重組抗LAM抗體時(shí)最常遇到的八大問(wèn)題，并提供了詳盡的分析與對(duì)策。

問(wèn)題一：ELISA 讀數(shù)過(guò)低，無(wú)法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線

•   可能原因 A：包被條件不佳。LAM 作為糖脂，容易在酸性環(huán)境下解離。

   ?   解決方案：確保包被緩沖液 pH 值嚴(yán)格控制在 9.4 - 9.8 之間；嘗試延長(zhǎng)包被時(shí)間至 48 小時(shí)（4℃）；或在包被液中加入 10 mM MgCl? 以增強(qiáng)糖脂與塑料板的吸附力。

•   可能原因 B：一抗效價(jià)下降。

   ?   解決方案：檢查抗體儲(chǔ)存歷史，若存在反復(fù)凍融，請(qǐng)更換新分裝管；適當(dāng)提高一抗的孵育濃度。

問(wèn)題二：Western Blot 出現(xiàn)高背景或非特異性雜帶

•   可能原因 A：封閉不夠。

   ?   解決方案：LAM 具有較強(qiáng)的疏水性，建議使用 5% 脫脂牛奶 + 0.1% Tween-20 進(jìn)行強(qiáng)化封閉；或在封閉液中添加 0.1% 的魚明膠（Fish Gelatin）。

•   可能原因 B：二抗交叉反應(yīng)。

   ?   解決方案：本產(chǎn)品為人源抗體，若使用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，需確認(rèn)二抗是否去除了Fc段的交叉吸附（Pre-adsorbed）。建議使用 Fab 段特異性的二抗。

問(wèn)題三：實(shí)驗(yàn)重復(fù)性極差（CV值 > 15%）

•   可能原因：移液操作誤差或洗板機(jī)流速不均。

•   解決方案：在稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，務(wù)必使用校準(zhǔn)過(guò)的移液器并更換低吸附吸頭；如果是洗板導(dǎo)致，檢查洗液瓶是否有氣泡，增加洗板停留時(shí)間（Soak time）至 60 秒。

問(wèn)題四：在細(xì)胞阻斷實(shí)驗(yàn)中未見(jiàn)預(yù)期表型改變

•   可能原因 A：抗體無(wú)法接觸靶點(diǎn)。

•   解決方案：LAM 深埋于結(jié)核菌厚厚的莢膜中。建議在感染前使用超聲破碎或輕微皂苷（Saponin）透化處理細(xì)菌，使抗體能夠真正接觸到 LAM 表位。

•   可能原因 B：濃度不足。

•   解決方案：進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，使用 1, 10, 50, 100 μg/mL 的梯度濃度測(cè)試細(xì)胞毒性及中和效率。

問(wèn)題五：產(chǎn)品解凍后出現(xiàn)輕微渾濁或沉淀

•   可能原因：蛋白質(zhì)在凍融過(guò)程中發(fā)生聚集，或因長(zhǎng)期存放產(chǎn)生了微量聚合物。

•   解決方案：切勿劇烈震蕩。將管子插在碎冰上，使用超聲波水浴鍋輕柔震蕩 1 分鐘使其重新溶解；若沉淀無(wú)法溶解，可于 4℃ 下以 12,000 rpm 離心 10 分鐘，小心吸取上清液分裝使用。

問(wèn)題六：SEC-HPLC 檢測(cè)純度低于產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告（COA）

•   可能原因：緩沖液中含有高濃度鹽離子或去垢劑，影響了色譜柱分離效果。

•   解決方案：上樣前務(wù)必使用脫鹽柱（Desalting Column）將抗體置換至 HPLC 兼容的等度洗脫液（如 150 mM 磷酸鈉緩沖液，pH 7.0）中。

問(wèn)題七：進(jìn)行抗體偶聯(lián)（如生物素化）后失去結(jié)合能力

•   可能原因：偶聯(lián)反應(yīng)中使用的溶劑（如DMF、DMSO）比例過(guò)高，導(dǎo)致抗體變性。

•   解決方案：嚴(yán)格控制有機(jī)相比例不超過(guò) 5%（v/v）；偶聯(lián)反應(yīng)需在 pH 8.0 - 8.5 的硼酸鹽緩沖液中進(jìn)行；反應(yīng)結(jié)束后立即使用 PD-10 脫鹽柱去除游離生物素。

問(wèn)題八：微陣列點(diǎn)樣后容易脫落

•   可能原因：點(diǎn)樣濃度過(guò)低或玻片表面醛基活性喪失。

•   解決方案：將 HPAB-M0560-YC 與點(diǎn)樣緩沖液按 1:1 混合后點(diǎn)樣；在點(diǎn)樣環(huán)境中放置飽和硫酸銅溶液以維持 70% 左右的相對(duì)濕度，防止液滴在點(diǎn)樣過(guò)程中過(guò)度蒸發(fā)。

?? 安全與免責(zé)聲明

1. 安全防護(hù)：盡管本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌及無(wú)熱原處理，但仍屬于生物源性制劑。操作過(guò)程中請(qǐng)始終穿戴實(shí)驗(yàn)服、佩戴一次性手套和護(hù)目鏡。避免產(chǎn)生氣溶膠，切勿用口吸移液器。

2. 廢棄物處理：所有接觸過(guò)本產(chǎn)品的吸頭、離心管及殘余液體均視為潛在的生物危害廢棄物。必須經(jīng)過(guò) 10% 漂白劑或 75% 酒精浸泡消毒至少 30 分鐘后，方可作為醫(yī)療垃圾處理。

3. 應(yīng)用限制聲明：本產(chǎn)品（HPAB-M0560-YC）僅供經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的科研人員或診斷機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室使用。除非另有明確書面授權(quán)，不得直接用于人體或動(dòng)物的體內(nèi)診斷、治療或注射。

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